সেল-ফ্রি ডিএনএ ব্যবহার করে প্রতিস্থাপনের পরে সলিড অঙ্গগুলির স্বাস্থ্যের উপর নজর রাখা

সিএফডিএনএ ভিত্তিক ডায়াগনস্টিকস টিস্যু বায়োপসি অপ্রচলিত করতে পারে
Costly and invasive tissue biopsies to detect allograft rejection after transplantation have numerous limitations. প্রতিস্থাপনের পরে অ্যালোগ্রাফ্ট প্রত্যাখ্যান সনাক্ত করতে ব্যয়বহুল এবং আক্রমণাত্মক টিস্যু বায়োপসিগুলির অসংখ্য সীমাবদ্ধতা রয়েছে। Assays based on cell-free DNA (cfDNA)—circulating fragments of DNA released from cells, tissues, and organs as they undergo natural cell death—have been intensively studied recently and could ultimately improve our ability to detect rejection, implement earlier changes in management, and even enhance the long-term survival of transplanted organs. সেল-ফ্রি ডিএনএ (সিএফডিএনএ) ভিত্তিক অ্যাসস - কোষ, টিস্যু এবং অঙ্গগুলি থেকে প্রাকৃতিক কোষের মৃত্যু থেকে মুক্তি পাওয়া ডিএনএ-র সঞ্চালিত খণ্ডগুলি-সম্প্রতি অবিচ্ছিন্নভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে এবং শেষ পর্যন্ত প্রত্যাখ্যান সনাক্তকরণের আমাদের দক্ষতা উন্নত করতে পারে, ব্যবস্থাপনায় পূর্ববর্তী পরিবর্তনগুলি প্রয়োগ করতে পারে , এমনকি প্রতিস্থাপিত অঙ্গগুলির দীর্ঘমেয়াদী বেঁচে থাকা বৃদ্ধি করে।
CfDNA assays that circumvent the need for whole-genome sequencing (WGS) and the need for a priori knowledge of donor and/or recipient genotypes have powerful logistical advantages and are currently under clinical scrutiny. সিএফডিএনএ অ্যাসেস যা পুরো জিনোম সিকোয়েন্সিং (ডাব্লুজিএস) এর প্রয়োজন এবং দাতা এবং / বা প্রাপক জিনোটাইপগুলির অগ্রাধিকার জ্ঞানের প্রয়োজনকে শক্তিশালী লজিস্টিকাল সুবিধা দেয় এবং বর্তমানে এটি ক্লিনিকাল তদন্তের অধীনে রয়েছে ays In addition, improving knowledge of the organ-specific kinetics of donor-derived cfDNA (dd-cfDNA) following transplantation has also helped optimize these assays. তদতিরিক্ত, প্রতিস্থাপনের পরে দাতা দ্বারা প্রাপ্ত সিএফডিএনএ (ডিডি-সিএফডিএনএ) এর অঙ্গ-নির্দিষ্ট গতিবিজ্ঞানের জ্ঞানের উন্নতিও এই অ্যাসগুলিকে অনুকূল করতে সহায়তা করেছে। Laboratories also have introduced alternative methods for quantifying dd-cfDNA, such as digital droplet polymerase chain reaction (PCR) and organ-specific DNA methylation patterns. ল্যাবরেটরিগুলি ডিডি-সিএফডিএনএর পরিমাণ নির্ধারণের জন্য বিকল্প পদ্ধতিও চালু করেছে, যেমন ডিজিটাল ড্রপলেট পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পিসিআর) এবং অঙ্গ-নির্দিষ্ট ডিএনএ মেথিলিকেশন নিদর্শনগুলি। As such, the field of minimally invasive diagnostics based upon cfDNA is increasingly promising, one day potentially replacing traditional tissue biopsies. সেই হিসাবে, সিএফডিএনএ ভিত্তিক ন্যূনতম আক্রমণাত্মক ডায়াগনস্টিক্সের ক্ষেত্র ক্রমশ প্রতিশ্রুতিবদ্ধ হচ্ছে, একদিন সম্ভাব্যভাবে allyতিহ্যবাহী টিস্যু বায়োপসিগুলি প্রতিস্থাপন করে।
অর্গান প্রত্যাখাতে সিএফডিএনএর ভূমিকা
Rejection, referring to injury of a donated organ caused by the recipient's immune system, can cause allograft dysfunction and even patient death. প্রত্যাখ্যান, প্রাপকের ইমিউন সিস্টেম দ্বারা সৃষ্ট দান অঙ্গের আঘাতের কথা উল্লেখ করে অ্যালোগ্রাফ্ট কর্মহীনতা এমনকি রোগীর মৃত্যুর কারণ হতে পারে। T-cell mediated acute cellular rejection (ACR) occurs most often within the first 6 months post-transplant (1). টি-সেল মধ্যস্থতা তীব্র সেলুলার প্রত্যাখ্যান (ACR) বেশিরভাগ ক্ষেত্রে প্রথম 6 মাসের পোস্ট-ট্রান্সপ্ল্যান্ট (1) এর মধ্যে ঘটে। ACR involves accumulation of CD4+ and CD8+ T-cells in the interstitial space of the allograft as the recipient's immune system recognizes antigens on the donated organ as foreign. এসিআর এর মধ্যে অ্যালোগ্রাফ্টের আন্তঃস্থায়ী স্থানের মধ্যে সিডি 4 + এবং সিডি 8 + টি-কোষ জড়িত থাকে কারণ গ্রহীতার প্রতিরোধ ব্যবস্থা দান করা অঙ্গটিতে অ্যান্টিজেনকে বিদেশী হিসাবে স্বীকৃতি দেয়। These T-cells initiate an immune cascade that ultimately leads to programmed cell death (apoptosis) of the targeted cells. এই টি-কোষগুলি একটি প্রতিরোধক ক্যাসকেড শুরু করে যা শেষ পর্যন্ত লক্ষ্যযুক্ত কোষগুলির প্রোগ্রামড সেল ডেথ (অ্যাপোপটোসিস) বাড়ে। As these cells die, genomic DNA is cleaved and fragments of dd-cfDNA, measuring approximately 140 base pairs (bp) in length, are released to join the pool of recipient cfDNA in the blood and ultimately excreted in the urine (2). এই কোষগুলি মারা যাওয়ার সাথে সাথে জিনোমিক ডিএনএ ক্লিভ হয়ে যায় এবং ডিডি-সিএফডিএনএর টুকরো টুকরো করে দৈর্ঘ্যে প্রায় ১৪০ বেস জোড় (বিপি) পরিমাপ করা হয়, রক্তে প্রাপক সিএফডিএনএ-এর পুলটিতে যোগ দিতে এবং শেষ পর্যন্ত প্রস্রাবে বের হয় (২)।
Circulating cfDNA has recently been leveraged as a diagnostic tool to replace invasive biopsies in other areas of medicine, including analyzing fetal DNA fragments within the maternal circulation to identify genetic abnormalities in utero and sequencing circulating DNA released from tumor cells to identify cancer-related mutations. ক্যান্সারজনিত মিউটেশন সনাক্তকরণের জন্য জরায়ুতে জিনগত অস্বাভাবিকতা সনাক্ত করতে প্রসূতি সঞ্চালনের মধ্যে ভ্রূণের ডিএনএ খণ্ড বিশ্লেষণ করা এবং টিউমার কোষ থেকে মুক্তি প্রাপ্ত সার্কুলেশন ডিএনএ পর্যায়ক্রমে চিকিত্সার অন্যান্য ক্ষেত্রে আক্রমণাত্মক বায়োপসিগুলি প্রতিস্থাপনের জন্য সিএফডিএনএকে সম্প্রতি ডায়াগনস্টিক হাতিয়ার হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছে। In both these cases as well as in transplantation, high-throughput sequencing that identifies and quantifies DNA sequence differences distinguishes between the two different populations of cfDNA derived from distinct sources (2). এই উভয় ক্ষেত্রেই পাশাপাশি প্রতিস্থাপনে, হাই-থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং যা ডিএনএ ক্রম পার্থক্য চিহ্নিত করে এবং পরিমাণকে পৃথক উত্স (2) থেকে প্রাপ্ত সিএফডিএনএর দুটি পৃথক জনগোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্য করে। Three characteristics of cfDNA make it an excellent noninvasive candidate biomarker to detect rejection after solid organ transplantation: It can be obtained from a simple blood draw, its concentration accurately measured, and its nucleotide sequence easily identified. সিএফডিএনএর তিনটি বৈশিষ্ট্য দৃ organ় অঙ্গ প্রতিস্থাপনের পরে প্রত্যাখ্যান সনাক্ত করার জন্য এটি একটি দুর্দান্ত ননভাইভাসিভ প্রার্থী বায়োমোকারকে পরিণত করে: এটি একটি সাধারণ রক্ত ​​অঙ্কন থেকে পাওয়া যায়, এর ঘনত্ব সঠিকভাবে পরিমাপ করা হয় এবং নিউক্লিওটাইড ক্রমটি সহজেই চিহ্নিত করা যায়। Using cfDNA as a biomarker for ACR is also advantageous since it is derived from the injured cells of the donated organ and therefore should represent a direct measure of cell death occurring in the allograft. সিসিডিএনএনএকে এসিআর-এর বায়োমোকার হিসাবে ব্যবহার করাও সুবিধাজনক কারণ এটি দান করা অঙ্গের আহত কোষ থেকে প্রাপ্ত এবং তাই অ্যালোগ্রাফ্টে সংঘটিত কোষের মৃত্যুর প্রত্যক্ষ পরিমাপের প্রতিনিধিত্ব করা উচিত। Furthermore, cfDNA maintains all of the genetic features of the original genomic DNA, allowing the genetic material released from the donated organ to be differentiated from the cfDNA derived from cells of the recipient that are undergoing natural apoptosis (3). তদুপরি, সিএফডিএনএ মূল জিনোমিক ডিএনএর সমস্ত জিনগত বৈশিষ্ট্য বজায় রাখে, দানকৃত অঙ্গ থেকে মুক্তি প্রাপ্ত জিনগত উপাদানকে প্রাকৃতিক অ্যাপোপটোসিস (3) প্রাপ্ত গ্রহীতার কোষ থেকে প্রাপ্ত সিএফডিএনএ থেকে পৃথক হতে দেয়।
Frequent and accurate monitoring of allograft health is essential for transplant recipients' long-term survival. ট্রান্সপ্ল্যান্ট গ্রহীতাদের দীর্ঘমেয়াদে বেঁচে থাকার জন্য অ্যালোগ্রাফ্ট স্বাস্থ্যের ঘন এবং সঠিক পর্যবেক্ষণ অপরিহার্য। For heart transplantation (HT), endomyocardial biopsy (EMB) is the current gold standard for detecting ACR (4). হার্ট ট্রান্সপ্ল্যান্টেশনের জন্য (এইচটি), এন্ডোমিওকার্ডিয়াল বায়োপসি (ইএমবি) হ'ল এসিআর সনাক্তকরণের বর্তমান সোনার মান (4)। However, EMBs are costly with significant limitations, many of which are common to all organ biopsies (5-7). তবে, ইএমবিগুলি উল্লেখযোগ্য সীমাবদ্ধতার সাথে ব্যয়বহুল, যার অনেকগুলিই সমস্ত অঙ্গ বায়োপসিতে (5-7) সাধারণ। Moreover, the invasive nature of EMBs puts HT patients at risk for complications (6,8,9). অধিকন্তু, ইএমবিগুলির আক্রমণাত্মক প্রকৃতি এইচটি রোগীদের জটিলতার ঝুঁকিতে ফেলেছে (6,8,9)।
Unfortunately, currently available noninvasive methods including echocardiography or magnetic resonance imaging (MRI) lack sufficient specificity and sensitivity to reliably detect rejection (10-13). দুর্ভাগ্যক্রমে, বর্তমানে ইকোকার্ডিওগ্রাফি বা চৌম্বকীয় অনুরণন ইমেজিং (এমআরআই) সহ ননআইভ্যাসিভ পদ্ধতিগুলিতে নির্ভরযোগ্যভাবে প্রত্যাখ্যান (10-13) সনাক্ত করার জন্য যথেষ্ট নির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতার অভাব রয়েছে। Blood-based biomarkers, such as cfDNA, represent a promising alternative that could be readily implemented into clinical practice (14-17). সিএফডিএনএ-র মতো রক্ত-ভিত্তিক বায়োমার্কারগুলি এমন একটি প্রতিশ্রুতিবদ্ধ বিকল্প উপস্থাপন করে যা ক্লিনিকাল অনুশীলনে সহজেই প্রয়োগ করা যেতে পারে (14-17)।
তদন্ত এবং প্রত্যাখ্যান চলাকালীন সিএফডিএনএর গতিবিধি
Since cfDNA originates from the naturally occurring process of apoptosis, all individuals have detectable levels of cfDNA in their blood (18). যেহেতু সিএফডিএনএ প্রাকৃতিকভাবে অ্যাপোপটোসিসের প্রক্রিয়া থেকেই উদ্ভূত, তাই সমস্ত ব্যক্তির রক্তে সিএফডিএনএর সনাক্তকরণের মাত্রা থাকে (১৮) For healthy individuals, the majority of circulating cfDNA comes from hematopoietic cells that have undergone natural death related to cellular turnover. সুস্থ ব্যক্তিদের জন্য, সিএফডিএনএ প্রচলিত বেশিরভাগ হিমটোপয়েটিক কোষ থেকে আসে যা সেলুলার টার্নওভারের সাথে সম্পর্কিত প্রাকৃতিক মৃত্যুর মধ্যে পড়েছিল। Levels of cfDNA fluctuate for multiple reasons including infection, surgery, trauma, or even exhaustive exercise (2,19). সংক্রমণ, সার্জারি, ট্রমা বা সম্পূর্ণ ব্যায়াম (২,১৯) সহ একাধিক কারণে সিএফডিএনএ-এর স্তরগুলি ওঠানামা করে। Therefore, developing a cfDNA-based assay to detect rejection requires assessing the expected kinetics of dd-cfDNA release into the recipient's circulation post-transplant. সুতরাং, প্রত্যাখ্যান সনাক্ত করার জন্য সিএফডিএনএ-ভিত্তিক পার্শ্ব বিকাশের জন্য প্রাপকের রক্ত ​​সঞ্চালন পরবর্তী ট্রান্সপ্ল্যান্টে ডিডি-সিএফডিএনএ প্রকাশের প্রত্যাশিত গতিবিদ্যা সম্পর্কে মূল্যায়ন করা দরকার। This consideration is especially important since the release of dd-cfDNA over time post-transplant is organ-specific (20-22). এই বিবেচনাটি বিশেষত গুরুত্বপূর্ণ যেহেতু সময়ের সাথে সাথে dd-cfDNA প্রকাশের পরে ট্রান্সপ্লান্ট অঙ্গ-নির্দিষ্ট (20-22) হয়।
For example, at 1 day post-HT the average level of dd-cfDNA is 3.8 ± 2.3% (20). উদাহরণস্বরূপ, 1 দিনের পোস্ট-এইচ-তে ডিডি-সিএফডিএনএর গড় স্তর 3.8 ± 2.3% (20)। However, by 7 days the level of dd-cfDNA has declined rapidly and remains consistently low (<1%). যাইহোক, 7 দিনের মধ্যে dd-cfDNA এর মাত্রা দ্রুত হ্রাস পেয়েছে এবং ধারাবাহিকভাবে কম থাকে (<1%)। During an episode of acute rejection in the heart, the level of dd-cfDNA was found to increase to 4%–5% from a baseline of about 0.06% observed during quiescence. হার্টে তীব্র প্রত্যাখ্যানের একটি পর্ব চলাকালীন, ডিডি-সিএফডিএনএ-এর স্তরটি কোয়েসেন্সির সময় পর্যবেক্ষণকৃত 0.00% এর বেসলাইন থেকে 4% –5% পর্যন্ত বেড়েছে। The kinetics of dd-cfDNA observed in the circulation of HT recipients was similar to that observed after renal transplantation (22). এইচডি প্রাপকদের রক্ত ​​সঞ্চালনে পর্যবেক্ষণ করা ডিডি-সিএফডিএনএর গতিবিজ্ঞান রেনাল ট্রান্সপ্ল্যান্টেশনের (22) পরে পর্যবেক্ষণের সাথে মিল ছিল।
In contrast, recipients of bilateral lung transplants were found to have an average dd-cfDNA fraction of 26 ± 14% on the first postoperative day. বিপরীতে, দ্বিপক্ষীয় ফুসফুস প্রতিস্থাপনের প্রাপকদের প্রথম পোস্টোপারেটিভ দিনে গড়ে ডিডি-সিএফডিএনএ ভগ্নাংশ ছিল 26 26 14%। Furthermore, the reduction in dd-cfDNA was characterized by levels of dd-cfDNA that declined rapidly within the first week but then slowed and generally remained at 1%–3% (21). তদ্ব্যতীত, ডিডি-সিএফডিএনএ হ্রাসটি ডিডি-সিএফডিএনএ স্তর দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল যা প্রথম সপ্তাহের মধ্যে দ্রুত হ্রাস পেয়েছিল তবে ধীর হয়ে যায় এবং সাধারণত 1% –3% (21) এ থাকে। However, similar to heart and kidney transplants during an episode of acute rejection, the level of dd-cfDNA increased significantly, climbing to an average of 14%–15%. তবে তীব্র প্রত্যাখ্যানের একটি পর্বের সময় হার্ট এবং কিডনি প্রতিস্থাপনের অনুরূপ, ডিডি-সিএফডিএনএর মাত্রা উল্লেখযোগ্য পরিমাণে বৃদ্ধি পেয়েছে, গড়ে 14% –15% অবধি উঠে গেছে।
Differences in tissue mass and rates of cellular turnover account for this variability in the levels of dd-cfDNA released early post-transplant and during quiescence. টিস্যু ভর এবং সেলুলার টার্নওভারের হারের মধ্যে পার্থক্য এই পরিবর্তনশীলতার জন্য ডিডি-সিএফডিএনএর প্রাথমিক পর্যায়ে ট্রান্সপ্ল্যান্ট পরবর্তী এবং শান্ত থাকার সময় প্রকাশিত হয়। For example, differences in circulating dd-cfDNA levels in quiescent bilateral and single-lung transplants can be explained by the difference in cellular turnover, being 107 vs. 58 cells/second, respectively (21). উদাহরণস্বরূপ, শান্ত দ্বিপাক্ষিক এবং একক-ফুসফুসের প্রতিস্থাপনে ডিডি-সিএফডিএনএ স্তরের সঞ্চালনের পার্থক্যগুলি সেলুলার টার্নওভারের পার্থক্যের দ্বারা ব্যাখ্যা করা যেতে পারে, যথাক্রমে 107 বনাম 58 কোষ / সেকেন্ড, (21)। By contrast, in a quiescent transplanted heart, the cellular turnover rate is only 8 cells/second (21-23). বিপরীতে, একটি নিরিবিলি প্রতিস্থাপন হার্টে, সেলুলার টার্নওভারের হারটি মাত্র 8 কোষ / সেকেন্ড (21-23)। Thus, an understanding of the expected levels of dd-cfDNA associated with a given solid organ is essential to facilitate development of organ-specific assays that detect rejection. সুতরাং, প্রত্যাখ্যান সনাক্তকারী অঙ্গ-নির্দিষ্ট অ্যাসেসের বিকাশের সুবিধার্থে প্রদত্ত শক্ত অঙ্গের সাথে সম্পর্কিত ডিডি-সিএফডিএনএর প্রত্যাশিত স্তরের বোঝাপড়া অপরিহার্য। Once the kinetics of cfDNA release for a particular organ are understood, several methods exist for quantifying the relative amount of dd-cfDNA. একবার নির্দিষ্ট অঙ্গের জন্য সিএফডিএনএ প্রকাশের গতিবিজ্ঞানগুলি বোঝা গেলে, ডিডি-সিএফডিএনএর তুলনামূলক পরিমাণের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য বিভিন্ন পদ্ধতি বিদ্যমান exist
STRATEGIES TO DISTINGUISH RECIPIENT- VS. প্রাপ্তি নির্ধারণের কৌশল - বনাম DONOR-DERIVED CFDNA ডোনার-বিভক্ত সিএফডিএনএ
দাতা-প্রাপক লিঙ্গ-মিল নয়
For organ transplants in which the donor is male and the recipient is female, laboratories can leverage this sex mismatch to calculate dd-cfDNA levels from within the recipient's total cfDNA pool (17). অঙ্গ প্রতিস্থাপনের ক্ষেত্রে যেখানে দাতা পুরুষ এবং প্রাপক মহিলা, পরীক্ষাগারগুলি প্রাপকের মোট সিএফডিএনএ পুলের (17) থেকে ডিডি-সিএফডিএনএ স্তর গণনা করার জন্য এই যৌন মিল খুঁজে নিতে পারে। Researchers first demonstrated the feasibility of this approach in urine samples taken from female renal transplant recipients who had received a kidney from male donors and when they experienced rejection demonstrated elevated levels of dd-cfDNA in their urine that specifically contained regions found on the Y chromosome (17). গবেষকরা প্রথমে মহিলা দাতাদের কাছ থেকে কিডনি প্রাপ্ত মহিলা রেনাল ট্রান্সপ্ল্যান্ট গ্রহীতাদের থেকে নেওয়া প্রস্রাবের নমুনাগুলিতে এই পদ্ধতির সম্ভাব্যতা প্রদর্শন করেছিলেন এবং যখন তারা প্রত্যাখ্যানের শিকার হন তাদের প্রস্রাবে ডিডি-সিএফডিএনএ-র উচ্চতর স্তর প্রদর্শন করেছিলেন যা নির্দিষ্টভাবে ওয়াই ক্রোমোজোমে পাওয়া অঞ্চলগুলিকে অন্তর্ভুক্ত করে ( 17)। Although this approach allows for confident diagnosis of rejection in the allograft, sex-mismatch between the donor and recipient is relatively infrequent and not universally applicable. যদিও এই পদ্ধতির মাধ্যমে অ্যালোগ্রাফ্টে প্রত্যাখ্যানের আত্মবিশ্বাসজনক নির্ণয়ের অনুমতি পাওয়া যায় তবে দাতা এবং গ্রহীতার মধ্যে যৌন-অমিলটি তুলনামূলকভাবে বিরল এবং সর্বজনীনভাবে প্রযোজ্য নয়।
দাতা-প্রাপক ডিএনএ সিকোয়েন্স পার্থক্য
An organ transplant can also be regarded as a genome transplant, as the cells within a transplanted organ contain the genetic information of its donor. একটি অঙ্গ প্রতিস্থাপনকে জিনোম ট্রান্সপ্ল্যান্ট হিসাবেও বিবেচনা করা যেতে পারে, কারণ প্রতিস্থাপনকারী অঙ্গের কোষগুলিতে তার দাতার জিনগত তথ্য থাকে। As such, the concept of genome transplant dynamics (GTD) relies on the presence of genetic differences between the donor and recipient at a particular locus, which then can be leveraged to identify the origin of the circulating cfDNA (20-24). যেমন, জিনোম ট্রান্সপ্ল্যান্ট ডায়নামিক্সের ধারণা (জিটিডি) একটি নির্দিষ্ট লোকসে দাতা এবং গ্রহীতার মধ্যে জিনগত পার্থক্যের উপস্থিতির উপর নির্ভর করে, যার পরে প্রচলনকারী সিএফডিএনএ (20-24) এর উত্স সনাক্তকরণের জন্য উত্তোলন করা যেতে পারে। Ideally, the recipient would be homozygous for a single base (for example, AA) and at the same locus the donor would be homozygous for a different base (for example, GG). আদর্শভাবে, প্রাপক একক বেসের জন্য সমজাতীয় হবে (উদাহরণস্বরূপ, এএ) এবং একই লোকোসে দাতা একটি ভিন্ন বেসের জন্য সমজাতীয় হবে (উদাহরণস্বরূপ, জিজি)।
Given the genetic heterogeneity between individuals, tens of thousands of potentially informative loci across the genome can be interrogated using high-throughput sequencing to distinguish dd-cfDNA from recipient cfDNA (20,24). ব্যক্তিদের মধ্যে জিনগত বৈচিত্র্য দেওয়া, জেনোম জুড়ে কয়েক হাজার সম্ভাব্য তথ্যমূলক লোকিকে প্রাপক সিএফডিএনএ (20,24) থেকে ডিডি-সিএফডিএনএকে আলাদা করতে হাই-থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং ব্যবহার করে জিজ্ঞাসাবাদ করা যেতে পারে। This concept was first illustrated using banked samples from cardiac donors to obtain a priori donor genotypes for each donor-recipient pairing. এই ধারণাটি প্রথমে প্রতিটি দাতা-প্রাপক জুটির জন্য অগ্রাধিকার দাতা জিনোটাইপগুলি পেতে কার্ডিয়াক দাতাদের কাছ থেকে ব্যাঙ্কযুক্ত নমুনাগুলি ব্যবহার করে চিত্রিত হয়েছিল। After extracting and sequencing cfDNA from each recipient, the fraction of donor-specific molecules was determined. প্রতিটি প্রাপকের কাছ থেকে সিএফডিএনএ আহরণ এবং সিকোয়েন্সিংয়ের পরে, দাতা-নির্দিষ্ট অণুর ভগ্নাংশ নির্ধারণ করা হয়েছিল। In samples taken during or immediately preceding a biopsy-proven rejection event, the proportion of donor-specific single nucleotide polymorphisms (SNPs) was found to have increased from <1% to >3%–4% (24). বায়োপসি-প্রমাণিত প্রত্যাখ্যান ইভেন্টের সময় বা তাত্ক্ষণিকভাবে নেওয়া নমুনাগুলিতে, দাতা-নির্দিষ্ট একক নিউক্লিওটাইড পলিমর্ফিজমের (এসএনপি) অনুপাত <1% থেকে> 3% –4% (24) এ বেড়েছে বলে প্রমাণিত হয়েছিল।
This early retrospective study has now been validated prospectively. এই প্রারম্ভিক পূর্ববর্তী গবেষণা অধ্যয়ন এখন সম্ভাব্য বৈধ করা হয়েছে। Adult and pediatric heart and lung transplant recipients were recruited and genotypes for each donor-recipient pair were obtained through WGS with an average of 53,423 informative SNP markers identified (20). প্রাপ্তবয়স্ক এবং পেডিয়াট্রিক হার্ট এবং ফুসফুস ট্রান্সপ্ল্যান্ট প্রাপকদের নিয়োগ করা হয়েছিল এবং প্রতিটি দাতা-প্রাপক জুটির জিনোটাইপগুলি ডাব্লুজিএসের মাধ্যমে গড়ে 53,423 তথ্যবহুল এসএনপি চিহ্নিতকারী (20) দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। Overall, early detection of acute rejection was superior to that of AlloMap, the first Food and Drug Administration-approved non-invasive approach to detecting ACR after HT based on transcriptome analysis (25). সামগ্রিকভাবে, তীব্র প্রত্যাখ্যানের প্রাথমিক সনাক্তকরণটি অ্যালোম্যাপের তুলনায় উচ্চতর ছিল, ট্রান্সক্রিপ্টাম বিশ্লেষণের ভিত্তিতে এইচটি-র পরে এসিআর সনাক্তকরণের জন্য প্রথম খাদ্য ও ওষুধ প্রশাসন-অনুমোদিত অ-আক্রমণাত্মক পদ্ধতির অনুমোদন দেওয়া হয়েছিল।
Research also has shown that WGS not only provides information about a graft but also a patient's virome and overall state of immunosuppression. গবেষণায় আরও প্রমাণিত হয়েছে যে ডাব্লুজিএস কেবল একটি গ্রাফ্টের তথ্যই সরবরাহ করে না, রোগীর ভাইরাস এবং ইমিউনোস্প্রেসনের সামগ্রিক অবস্থাও সরবরাহ করে। This represents a potentially great advantage unobtainable by other assays (26-28). এটি অন্যান্য অ্যাসেসের (26-28) অপ্রয়োজনীয় একটি সম্ভাব্য দুর্দান্ত সুবিধা উপস্থাপন করে।
However, WGS faces challenges that could prevent it from being implemented routinely in clinical practice. তবে ডাব্লুজিএস চ্যালেঞ্জগুলির মুখোমুখি হয়েছে যা ক্লিনিকাল অনুশীলনে এটি নিয়মিতভাবে প্রয়োগ হতে বাধা দিতে পারে। For example, while a recipient's genetic information can be easily obtained, this is not always true for a donor. উদাহরণস্বরূপ, যখন কোনও প্রাপকের জেনেটিক তথ্য সহজেই পাওয়া যায়, এটি কোনও দাতার ক্ষেত্রে সর্বদা সত্য নয়। Moreover, WGS is costly, labor intensive, and time-consuming. তদুপরি, ডাব্লুজিএস ব্যয়বহুল, শ্রম নিবিড় এবং সময়সাপেক্ষ।
An alternative method employs a panel of genotyped polymorphic SNPs identified within the pool of extracted cfDNA thereby eliminating the need for a priori knowledge of a donor's specific genotype (29). একটি বিকল্প পদ্ধতিতে জেনোটাইপড পলিমর্ফিক এসএনপিগুলির একটি প্যানেল নিয়োগ করা হয় যা এক্সট্রাক্ট সিএফডিএনএ-এর পুলের মধ্যে সনাক্ত করা হয় যার দ্বারা কোনও দাতার নির্দিষ্ট জিনোটাইপ (29) এর প্রাইরি জ্ঞানের প্রয়োজনীয়তা দূর করে। Unlike kidney and liver transplants, which often occur between closely related individuals, the donor-recipient pairs for heart and lung transplants typically are not related. কিডনি এবং যকৃতের প্রতিস্থাপনের বিপরীতে, যা প্রায়শই ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত ব্যক্তিদের মধ্যে ঘটে থাকে, সাধারণত হৃদপিণ্ড এবং ফুসফুস প্রতিস্থাপনের জন্য দাতা-গ্রহীতার জুড়ি সাধারণত সম্পর্কিত নয়। GTD requires genotyping of both the transplant recipient and donor. জিটিডি-র প্রতিস্থাপন প্রাপক এবং দাতা উভয়ের জিনোটাইপিং প্রয়োজন। However, in practice, donor genotype information is often unavailable. তবে, অনুশীলনে, দাতা জিনোটাইপ তথ্য প্রায়শই অনুপলব্ধ থাকে। Here, we address this issue by developing an algorithm that estimates dd-cfDNA levels in the absence of a donor genotype. এখানে, আমরা একটি অ্যালগরিদম বিকাশ করে এই সমস্যাটি মোকাবিলা করি যা দাতা জিনোটাইপের অনুপস্থিতিতে dd-cfDNA স্তরের অনুমান করে। Our algorithm predicts heart and lung allograft rejection with an accuracy that is similar to conventional GTD. আমাদের অ্যালগরিদম প্রচলিত জিটিডি-র অনুরূপ নির্ভুলতার সাথে হৃদয় এবং ফুসফুস অ্যালোগ্রাফ্ট প্রত্যাখ্যানের পূর্বাভাস দেয়। We furthermore refined the algorithm to handle closely related recipients and donors, a scenario that is common in bone marrow and kidney transplantation. আমরা আরও ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত প্রাপক এবং দাতাদের পরিচালনা করতে অ্যালগরিদমকে পরিমার্জন করেছি, এমন একটি দৃশ্য যা অস্থি মজ্জা এবং কিডনি প্রতিস্থাপনে সাধারণ। We show that it is possible to estimate dd-cfDNA in bone marrow transplant patients who are unrelated or who are siblings of the donors, using a hidden Markov model. আমরা দেখাই যে কোনও অগোচর মার্কোভ মডেল ব্যবহার করে যারা সম্পর্কযুক্ত নয় বা দাতাদের ভাই-বোন, অস্থি মজ্জা প্রতিস্থাপনকারী রোগীদের ডিডি-সিএফডিএনএ অনুমান করা সম্ভব। Therefore, algorithms have been developed for heart and lung transplants which assume that the donor's genotype occurs at the same frequency as the general population. সুতরাং, হৃদপিণ্ড এবং ফুসফুসের প্রতিস্থাপনের জন্য অ্যালগরিদমগুলি তৈরি করা হয়েছে যা ধরে নেয় যে দাতার জিনোটাইপটি সাধারণ জনগণের মতো একই ফ্রিকোয়েন্সিতে ঘটে। Based on these frequencies and comparison to the known genotype of the recipient, the fraction of dd-cfDNA can be reliably estimated from the total pool of cfDNA isolated from a recipient's plasma sample. এই ফ্রিকোয়েন্সি এবং প্রাপকের জ্ঞাত জিনোটাইপের সাথে তুলনা করে, ডিডি-সিএফডিএনএর ভগ্নাংশটি প্রাপকের প্লাজমা নমুনা থেকে বিচ্ছিন্ন সিএফডিএনএর মোট পুল থেকে নির্ভরযোগ্যভাবে অনুমান করা যায়।
In the case of lung transplantation, this single-genome model, when compared to the methodology using both donor and recipient genotypes, was found to provide comparable fractions of dd-cfDNA. ফুসফুসের প্রতিস্থাপনের ক্ষেত্রে, এই একক জিনোম মডেলটি যখন দাতা এবং প্রাপক উভয় জিনোটাইপ ব্যবহারের পদ্ধতিটির সাথে তুলনা করে, তখন dd-cfDNA এর তুলনামূলক ভগ্নাংশ সরবরাহ করতে দেখা যায়। However, when researchers applied this same algorithm to HT, the estimated levels of dd-cfDNA were not as strongly correlated as in lung transplants. যাইহোক, গবেষকরা যখন এইচটি এই একই অ্যালগরিদম প্রয়োগ করেছিলেন, তখন dd-cfDNA এর আনুমানিক মাত্রা ফুসফুসের প্রতিস্থাপনের মতো দৃ strongly়ভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল না। This might be related to the lower absolute amounts of dd-cfDNA present after HT. এটি এইচটি-র পরে উপস্থিত ডিডি-সিএফডিএনএ-র নিম্ন পরম পরিমাণের সাথে সম্পর্কিত হতে পারে। This is another example of organ-specific cfDNA kinetics that can influence assay results and must be taken into account (30). এটি অঙ্গ-নির্দিষ্ট সিএফডিএনএ গতিবিজ্ঞানের আরেকটি উদাহরণ যা পারদর্শী ফলাফলগুলিকে প্রভাবিত করতে পারে এবং এটি অবশ্যই বিবেচনায় নেওয়া উচিত (30)।
In the case of renal transplantation, prospective studies have been conducted to ascertain the utility of dd-cfDNA levels, identified using known donor-specific SNPs, as a viable marker for rejection. রেনাল ট্রান্সপ্ল্যান্টের ক্ষেত্রে, ডিডি-সিএফডিএনএ স্তরের ইউটিলিটি নির্ধারণের জন্য সম্ভাব্য অধ্যয়ন পরিচালিত হয়েছে, যা পরিচিত দাতা-নির্দিষ্ট এসএনপিগুলি প্রত্যাখ্যানের জন্য কার্যকর হিসাবে চিহ্নিত করেছে। In one such study, 384 kidney recipients were recruited from 14 clinical sites to provide blood samples at scheduled intervals and at times of clinically indicated biopsies (31). এরকম একটি গবেষণায়, নির্ধারিত বিরতিতে এবং ক্লিনিকভাবে নির্দেশিত বায়োপসিগুলির সময়ে (31) রক্তের নমুনা সরবরাহ করার জন্য 14 টি ক্লিনিকাল সাইট থেকে 384 কিডনি গ্রাহক নিয়োগ করা হয়েছিল। Overall, the study focused on the correlation between the histology in 107 biopsy specimens from 102 patients and the levels of dd-cfDNA found in matched plasma samples. সামগ্রিকভাবে, গবেষণায় ১০২ জন রোগীর 107 বায়োপসি নমুনায় এবং ম্যাচযুক্ত প্লাজমার নমুনায় প্রাপ্ত ডিডি-সিএফডিএনএর স্তরের হিস্টোলজির মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্কের দিকে দৃষ্টি নিবদ্ধ করা হয়েছিল। More specifically, 27 biopsy samples from 27 patients with active rejection were obtained along with 80 biopsy samples from 75 patients without active rejection. আরও সুনির্দিষ্টভাবে বলা যায়, সক্রিয় প্রত্যাখ্যান থাকা 27 রোগীর 27 টি বায়োপসি নমুনা সহ 75 টি সক্রিয় প্রত্যাখ্যান ছাড়াই 80 টি বায়োপসি নমুনা প্রাপ্ত হয়েছিল।
In this study, active rejection included acute antibody-mediated rejection (AMR), chronic AMR, and ACR. এই সমীক্ষায়, সক্রিয় প্রত্যাখ্যানগুলির মধ্যে তীব্র অ্যান্টিবডি-মধ্যস্থতা প্রত্যাখ্যান (এএমআর), ক্রনিক এএমআর এবং এসিআর অন্তর্ভুক্ত ছিল। The assay used in this study employed a 1% cutoff for the fraction of dd-cfDNA to indicate the presence or absence of active rejection and was found to have 85% specificity (95% CI, 79%–91%) and 59% sensitivity (95% CI, 44%–74%). এই গবেষণায় ব্যবহৃত অ্যাস ডিডি-সিএফডিএনএ-র ভগ্নাংশের জন্য 1% কাটঅফ নিযুক্ত করে সক্রিয় প্রত্যাখানের উপস্থিতি বা অনুপস্থিতি নির্দেশ করে এবং 85% নির্দিষ্টতা (95% সিআই, 79% -91%) এবং 59% সংবেদনশীলতা পাওয়া গেছে (95% সিআই, 44% –74%)। The sensitivity of this assay was greater for discriminating between active and absent AMR, as the use of a cutoff of 1% dd-cfDNA was found to have an 83% specificity (95% CI, 78%–89%) and 81% sensitivity (95% CI, 67%–100%). এই পার্সের সংবেদনশীলতা সক্রিয় এবং অনুপস্থিত এএমআরের মধ্যে পার্থক্য করার জন্য আরও বেশি ছিল, কারণ 1% ডিডি-সিএফডিএনএ-র একটি কাট অফ ব্যবহারের ক্ষেত্রে 83% নির্দিষ্টতা (95% সিআই, 78% -89%) এবং 81% সংবেদনশীলতা পাওয়া গেছে (95% সিআই, 67% –100%)। Notably, in both cases, the sensitivity declined substantially when the fraction of dd-cfDNA exceeded 3%. উল্লেখযোগ্যভাবে, উভয় ক্ষেত্রেই সংবেদনশীলতা হ্রাস পেয়েছে যখন dd-cfDNA এর ভগ্নাংশ 3% ছাড়িয়ে গেছে।
To improve specificity and sensitivity of a non-invasive cfDNA-based assay to detect rejection following renal transplantation, investigators also have surveyed the absolute amount of dd-cfDNA (32-33). রেনাল ট্রান্সপ্ল্যান্টেশনের পরে প্রত্যাখ্যান সনাক্ত করার জন্য একটি অ আক্রমণাত্মক সিএফডিএনএ-ভিত্তিক পার্সের সুনির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতা উন্নত করতে তদন্তকারীরা ডিডি-সিএফডিএনএর (32323) পরম পরিমাণও জরিপ করেছেন। By interrogating the absolute amount of dd-cfDNA, one can eliminate the artificial changes in the fraction of dd-cfDNA due to increases in total cfDNA levels caused by non-rejection events, such as infection, trauma, or exercise, potentially creating a more accurate assay. ডিডি-সিএফডিএনএর পরম পরিমাণে জিজ্ঞাসাবাদ করার মাধ্যমে, সংক্রমণ, ট্রমা বা ব্যায়ামের মতো অ-প্রত্যাখ্যান ইভেন্টগুলির দ্বারা সৃষ্ট সিএফডিএনএ-র মাত্রায় বৃদ্ধি পাওয়ায় কেউ ডিডি-সিএফডিএনএ-র ভগ্নাংশের কৃত্রিম পরিবর্তনগুলি দূর করতে পারে, সম্ভাব্যভাবে আরও কিছু তৈরি করে সঠিক পারদ
To investigate this possibility, one study employed 32 informative copy number variants (CNVs) based on population frequencies, as opposed to relative proportions of donor and recipient SNPs at given loci (32). এই সম্ভাবনাটি খতিয়ে দেখার জন্য, একটি গবেষণায় জনসাধারণের ফ্রিকোয়েন্সি ভিত্তিতে 32 তথ্যমূলক কপি নম্বর ভেরিয়েন্ট (সিএনভি) নিয়োগ করা হয়েছে, প্রদেয় লোকাইতে (32) দাতা এবং প্রাপক এসএনপিগুলির তুলনামূলকভাবে অনুপাতের বিপরীতে। All CNVs not present within a recipient's genome but present within the extracted cfDNA were therefore assumed to represent dd-cfDNA. সমস্ত সিএনভিগুলি প্রাপকের জিনোমের মধ্যে উপস্থিত না হলেও উত্তোলিত সিএফডিএনএর মধ্যে উপস্থিত তাই ডিডি-সিএফডিএনএ উপস্থাপন করে বলে ধরে নেওয়া হয়েছিল।
Interestingly, while the specificity and sensitivity improved overall with the use of absolute dd-cfDNA levels, this assay also had a greater capacity to distinguish between the presence and absence of active AMR, as opposed to cases of active ACR. মজার বিষয় হচ্ছে, নিখুঁত ডিডি-সিএফডিএনএ স্তরের ব্যবহারের সাথে সুনির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতা সামগ্রিকভাবে উন্নত হয়েছে, তবে এই অ্যাসে সক্রিয় এসিআর এর বিপরীতে সক্রিয় এএমআর উপস্থিতি এবং অনুপস্থিতির মধ্যে পার্থক্য করার বৃহত্তর ক্ষমতা ছিল। In addition, serum creatinine levels were not sufficient in discriminating between active rejection and quiescence, likely because it is more indicative of glomerular function as opposed to kidney tissue damage (31-33). তদ্ব্যতীত, সেরাম ক্রিয়েটিনাইন স্তরগুলি সক্রিয় প্রত্যাখ্যান এবং চুপচাপের মধ্যে বৈষম্যমূলক পর্যায়ে যথেষ্ট ছিল না, সম্ভবত কারণ এটি কিডনি টিস্যু ক্ষতির বিপরীতে গ্লোোম্যারুলার ফাংশনের আরও সূচক (31-33)।
Another study explored the absolute levels of dd-cfDNA in kidney transplant recipients related to levels of tacrolimus, an immunosuppressant (33). অন্য একটি গবেষণায় ট্যাক্রোলিমাসের স্তরের সাথে সম্পর্কিত কিডনি প্রতিস্থাপন প্রাপকদের ডিডি-সিএফডিএনএর পরম স্তরের সন্ধান করা হয়েছিল, একজন ইমিউনোসপ্রেসেন্ট (৩৩)। Here, the researchers found that the absolute amount of dd-cfDNA was substantially higher in patients with lower tacrolimus levels (<8 μg/L) in comparison to those with higher drug levels. এখানে, গবেষকরা দেখতে পেয়েছেন যে উচ্চতর ওষুধের স্তরগুলির তুলনায় ডিগ্রি-সিএফডিএনএর নিখুঁত পরিমাণ নিম্ন ট্যাক্রোলিমাস স্তরগুলির (<8 μg / L) রোগীদের ক্ষেত্রে যথেষ্ট পরিমাণে বেশি ছিল। These data suggest that dd-cfDNA levels also have the potential to detect allograft injury resulting from inadequate immunosuppression. এই তথ্যগুলি প্রমাণ করে যে dd-cfDNA স্তরের অপর্যাপ্ত ইমিউনোসপ্রেসনের ফলে অ্যালোগ্রাফ্ট আঘাত সনাক্ত করারও সম্ভাবনা রয়েছে।
Laboratories also have proposed alternatives to WGS. পরীক্ষাগারগুলিও ডাব্লুজিএসের বিকল্প প্রস্তাব করেছে। Our group explored targeted sequencing of 124 highly polymorphic (minor allele frequency [MAF] >0.4) SNPs using a commercially available panel, next-generation sequencing, and a novel algorithm (34). আমাদের গোষ্ঠীটি বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ প্যানেল, পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং এবং একটি উপন্যাসের অ্যালগরিদম (34) ব্যবহার করে 124 অত্যন্ত পলিমারফিক (মাইনাল অ্যালিল ফ্রিকোয়েন্সি [এমএএফ]> 0.4) এর টার্গেট সিকোয়েন্সিং অন্বেষণ করেছে। This approach significantly reduced the total amount of sequencing required, decreasing costs and assay time, and enabling rapid analysis. এই পদ্ধতির ফলে প্রয়োজনীয় ক্রমগুলির মোট পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, ব্যয় এবং অ্যাসের সময় কমেছে এবং দ্রুত বিশ্লেষণ সক্ষম করে। However, since this assay relies upon differences in MAF between individuals, it would not be robust for closely related donor–recipient pairs, such as seen in living-related kidney donation. তবে, যেহেতু এই পার্সে ব্যক্তিদের মধ্যে এমএএফ-র মধ্যে পার্থক্যের উপর নির্ভরশীল, তাই এটি ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত দাতা-প্রাপক যুগলদের পক্ষে যেমন জীবন-সম্পর্কিত কিডনি দানের ক্ষেত্রে দেখা যায় তেমন শক্তিশালী হবে না। It remains to be validated for detecting moderate or greater rejection events. এটি মাঝারি বা বৃহত্তর প্রত্যাখাত ইভেন্টগুলি সনাক্ত করার জন্য বৈধ হওয়ার কথা।
Laboratories also have explored using polymorphic SNPs to quantify dd-cfDNA combined with the technology of digital droplet PCR (30,35-37). ল্যাবরেটরিগুলি ডিজিটাল ড্রপলেট পিসিআর (30,35-37) প্রযুক্তির সাথে মিলিয়ে dd-cfDNA পরিমাণ নির্ধারণের জন্য পলিমারফিক এসএনপি ব্যবহার করে অনুসন্ধান করেছে। Using 41 highly polymorphic SNPs, stable kidney and HT recipients showed dd-cfDNA fractions of 2%–3% with stable liver transplant recipients having a level of 7% (35). Highly১ টি উচ্চ পলিমারফিক এসএনপি ব্যবহার করে স্থিতিশীল কিডনি এবং এইচটি প্রাপকরা d% (৩৫) এর স্তরযুক্ত স্থিতিশীল লিভার ট্রান্সপ্ল্যান্ট গ্রহীতাদের সাথে 2% –3% এর ডিডি-সিএফডিএনএ ভগ্নাংশ দেখান।
উপসংহার
The use of a costly and invasive tissue biopsy to detect allograft rejection has significant limitations. অ্যালোগ্রাফ্ট প্রত্যাখ্যান সনাক্ত করতে ব্যয়বহুল এবং আক্রমণাত্মক টিস্যু বায়োপসি ব্যবহারের উল্লেখযোগ্য সীমাবদ্ধতা রয়েছে। As such, a minimally invasive assay that can directly and accurately assess the health of the entire transplanted organ represents a holy grail in solid organ transplantation. এ হিসাবে, একটি সংক্ষিপ্ত আক্রমণাত্মক পারদ যা পুরো এবং চূড়ান্তভাবে পুরো প্রতিস্থাপিত অঙ্গের স্বাস্থ্যের মূল্যায়ন করতে পারে তা দৃ solid় অঙ্গ প্রতিস্থাপনে একটি পবিত্র কঙ্কর প্রতিনিধিত্ব করে।
The use of cfDNA after transplantation has shown some initial promise, but further study and validation is required to improve our understanding of both the basic biology of cfDNA as well as its behavior post-transplant. প্রতিস্থাপনের পরে সিএফডিএনএ ব্যবহার কিছু প্রাথমিক প্রতিশ্রুতি দেখিয়েছে, তবে সিএফডিএনএর বুনিয়াদি জীববিজ্ঞানের পাশাপাশি এর আচরণ-প্রতিস্থাপন পরবর্তী উভয় বিষয়ে আমাদের বোঝার উন্নতি করার জন্য আরও অধ্যয়ন ও বৈধতা প্রয়োজন। At this time, it is clear that important organ-specific differences exist, and patterns of cfDNA release may also differ depending on the type of rejection event. এই সময়ে, এটি স্পষ্ট যে গুরুত্বপূর্ণ অঙ্গ-নির্দিষ্ট পার্থক্য বিদ্যমান এবং সিএফডিএনএ প্রকাশের ধরণগুলিও প্রত্যাখ্যান ইভেন্টের ধরণের উপর নির্ভর করে পৃথক হতে পারে। However, cfDNA represents one of the most promising technologies yet developed to complement or even ultimately replace the tissue biopsy. তবে সিএফডিএনএ এমন এক প্রতিশ্রুতিবদ্ধ প্রযুক্তিগুলির প্রতিনিধিত্ব করে যা এখনও পর্যন্ত টিস্যু বায়োপসি পরিপূরক বা প্রতিস্থাপনের জন্য বিকাশ লাভ করেছে।